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篩選穩定細胞株的3大方法!(201911)

2019-11-07 21:36:12

眾所周知,使用混合穩定株可以獲得多個不同的單克隆穩定細胞株。因為穩定整合往往伴隨ATCC細胞保藏中心著插入失活宿主內源基因,所以實驗時通過使用混合穩定靠譜的細胞株,或者對多個單克隆穩定細胞株進行比較,可以幫助研究人員獲得更精確的實驗數據。篩選穩定細胞株主要有三類方法:1:單克隆環法此類方法多用于整合率低的轉染方法或者需要得到單克隆細胞株的實驗。其優點在于工作量小,只需將轉染或者病毒載體感染后的細胞按照一定的細胞密度轉移至新皿中,并使用合適的藥物進行篩選,最后在克隆環的幫助下對單克微生物資源中心隆細胞株進行挑選,并在新皿中完成擴增。2:96孔單克隆稀釋法此類方法同樣多用于整合率低的轉染方法或者需要得到單克隆細胞株以及篩選懸浮細胞穩定株的實驗。其優點在于,理論上可以得到非常均一的單克隆,同時可以篩選懸浮細胞穩定株。其缺點在于,工作量比較大菌株細胞。3:逆轉錄病毒混合克隆制備法
此類方法適用于需要制備混合穩定細胞株。優點在于可以在短時間內獲得穩定細胞株,同時也可以隨時將細胞稀釋轉移至新皿中獲得單克隆細胞株。傾向于整合于轉錄起始位點附近的,容易造成下游基因的激活;而整合于轉錄活躍基因內的,容易導致整合區基因的插入失活??偠灾?對于需要對細胞密度和藥物濃度繪制致死曲線并選取合適的細胞密度和藥物濃度進行篩選,一些細小的密度和濃度差別都會影響獲取均一的單克隆細胞株,影響獲取的克隆不純,國內資深的細胞株含有非整合的細胞。穩定整合的細胞在這樣一類混合細胞中,不會失去生長優勢。

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